TOXICOLOGÍA AMBIENTAL: EJERCICIOS PRÁCTICOS

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Víctor Manuel Vázquez Manzanares

Grado en Ciencias Ambientales, Facultad de Ciencias, Universidad de Málaga

(vazquez@uma.es)

1. En un ensayo de toxicidad se suspendió un determinado pesticida, en solución salina, a una concentración de 2 mg/ml. A partir de esta solución inicial se realizaron diluciones 1/4 de la muestra, depositándose cada dilución en pocillos creados sobre una placa de Petri, donde previamente se había sembrado una cepa de Escherichia coli. Tras 24 horas de incubación, se observó la existencia de halos de inhibición del crecimiento bacteriano alrededor de los pocillos. Los resultados fueron los siguientes:

Calcular la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) de este pesticida para E. coli.

La Concentración Mínima Inhibitoria (CIM) corresponde a la mínima concentración de antibiótico en donde no se observa desarrollo (turbidez). Para este caso concreto, seleccionamos:

Por lo tanto:

$$CMI=\frac { 1 }{ 16 } \cdot 2\quad{ mg }/{ ml=0,125\quad{ mg }/{ ml } }$$

Esta es la mínima concentración de antibiótico que inhibe el desarrollo in vitro de las bacterias.

2. Para conocer la concentración de microorganismos existente en el agua de un tanque de abastecimiento se recogieron 2 litros del efluente. A continuación se filtraron distintos volúmenes de la muestra por triplicado. Los filtros se depositaron sobre placas de agar nutritivo y se incubaron durante 24 horas a 22 °C. Tras la incubación se obtuvo el siguiente resultado:

Recuentos significativos comprendidos entre 20 y 200 colonias. Calcula el título presente en la muestra (expresado en ufc/100 ml).

En primer lugar tenemos en cuenta aquellos valores que se encuentran entre 20 y 200 colonias.

y además debemos pasar a ufc/100 ml:

Ahora realizamos la media:

$$\bar { x } =\frac { \sum { { x }_{ i } } }{ n } =\frac { 1380 }{ 5 } =276\quad { ufc }/{ 100ml }$$

3. Para estudiar la concentración de bacterias de una muestra de agua se empleó la técnica de Número Más Probable. Para ello se sembraron grupos de 5 tubos con distintas diluciones de las muestras (diluciones decimales). Los tubos se incubaron en anaerobiosis y a 37 °C durante 48 horas en un medio que contiene, entre otras sustancias, citrato férrico y tiosulfato de sodio. Tras el periodo de incubación se observaron los tubos, obteniéndose el siguiente resultado:

Si en algún caso procede, razona la respuesta.

Este método se basa en el principio de que una única célula viva puede desarrollarse y producir un cultivo turbio. A medida que se aumenta el factor de dilución, se alcanzará un punto en el cuál algunos tubos contengan tan solo un organismo y otros tubos ninguno.

Al determinar la probabilidad de que los tubos no recibieran ninguna célula, se puede determinar el número más probable de microorganismos presentes en la muestra original.

Vemos que dilución seleccionar: